技術原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats）是最新出現的一種由sgRNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。在這一系統中，sgRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA 進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統能夠對小鼠基因組特定基因位點進行精確編輯，目前瑞思元已經成功將此技術應用于小鼠基因敲除/敲入模型制備，以及條件性敲除（Loxp系統）模型制備。
目前瑞思元采取優化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應降到最低。
常規基因敲入
利用CRISPR/Cas9基因敲入技術，針對靶基因設計、構建相應的gRNA質粒和donor質粒，通過Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重組，引入特定的突變、報告基因（如EGFP、mCherry、RFP、LacZ等）或需要表達的功能性cDNA（如cre、Dre等）到目的基因的特定位點。
條件性基因敲入
利用CRISPR/Cas9基因敲入技術，針對靶基因設計、構建相應的gRNA質粒和donor質粒，將外源基因或特定突變敲入引入到基因組目的基因的特定位點。
Rosa26位點定點敲入
根據Rosa26基因序列設計合成sgRNA，將構建包含同源序列和目的序列的片段與Cas9、sgRNA共同顯微注射入受精卵中，Cas9/sgRNA復合體與基因組靶序列結合并切割雙鏈DNA，以含目的片段的同源序列為模版修復基因組DNA，最終獲得在Rosa26基因intron中定點插入片段的大小鼠。
制備流程
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